Cuando un haz de luz choca con una partícula en suspensión parte de la luz
se dispersa, parte de la luz se refleja y parte de la luz se absorbe.
La dispersión de la luz depende de: la longitud de onda de la luz (?), del
tamaño de la partícula y del índice de refracción de la partícula en relación
con el medio que la rodea.
La dispersión de la luz se puede medir por turbidimetría o por nefelometría.
En ambas técnicas, para dar como resultado una concentración de proteína
concreta, se compara la cantidad de luz dispersada o la tasa de aumento de
dispersión con los valores de dichos parámetros en estándares proteicos
conocidos.
LA TURBIDIMETRÍA:
mide la disminución de la luz transmitida a través
de una suspensión de partículas utilizando para ello un
espectrofotómetro (detector en la misma dirección del haz de luz, se
mide A o T). Se suele utilizar para soluciones concentradas (para que
haya una buena disminución de la luz transmitida) ej. determinación
de proteínas totales en suero, LCR u orina (haciendo que las
proteínas precipiten con TCA o ácido
sulfosalicílico).
La turbidez es la propiedad óptica de una muestra que hace que la radiación sea dispersada y absorbida más que transmitida en línea recta a través de la muestra. Es ocasionada por la presencia de materia suspendida en un líquido. Y para medirla utilizamos ambos métodos.
FUNDAMENTO DE LA TECNICA
La turbidimetría puede realizarse en espectrofotómetros de visible o violeta. Cuando la concentración de partículas en suspensión se mide por turbidimetría, la suspensión se pone en una cubeta similar a un tubo de ensayo, que permite realizar las medidas de las energía incidentes y transmitidas. La fuente de radiación más frecuentemente usadas es la lámpara dewolframio, pero pueden utilizarse otras fuentes de radiación visible. Si ponemos en la cubeta suspensiones coloreadas se debe usar un filtro para evitar que influya sobre los resultados dando valores excesivamente altos. Los Turbidímetros pueden incorporar cualquier detector que sea sensible a la longitud de onda transmitida.
Turbidímetros
Casi todas las medidas turbidimetricas se realizan con colorímetros
o espectrofotómetros ordinarios. También pueden usarse instrumentos visuales sencillos, tales como el trubidímetro Parr o el colorímetro Duboscq.
APLICACIONES
LA NEFELOMETRIA:
mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente con ángulos que oscilan entre 15 y 90º). Utiliza como instrumento el nefelómetro (en el que el detector se ubica con un ángulo que oscila entre 15 y 90º ej. a 90º). Se suele utilizar para concentraciones más diluidas.
Se basa en la detección de los complejos Ag-Ab, por la refracción que dichos complejos producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el antígeno y el anticuerpo correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos láser y se establece una relación entre lacantidad de luz que llega y la cantidad de complejos formados.
La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispercion de la radiación que atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante,solo es afectada la dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo. La intensidad depende de:
o espectrofotómetros ordinarios. También pueden usarse instrumentos visuales sencillos, tales como el trubidímetro Parr o el colorímetro Duboscq.
APLICACIONES
- Monitoreo del crecimiento del cultivo bacteriano.
- Contenido de macromoleculas.
- La de terminacion de aminoácidos, vitaminas y antibióticos.
- Control de calidad de agua, bebidas y productos alimenticios.
- Reacciones de precipitación.
LA NEFELOMETRIA:
mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente con ángulos que oscilan entre 15 y 90º). Utiliza como instrumento el nefelómetro (en el que el detector se ubica con un ángulo que oscila entre 15 y 90º ej. a 90º). Se suele utilizar para concentraciones más diluidas.
Se basa en la detección de los complejos Ag-Ab, por la refracción que dichos complejos producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el antígeno y el anticuerpo correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos láser y se establece una relación entre lacantidad de luz que llega y la cantidad de complejos formados.
La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispercion de la radiación que atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante,solo es afectada la dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo. La intensidad depende de:
- el número de partículas suspendidas,su tamaño, su forma.
- los índices refractivos de la partícula y del medio dispersante.
- la longitud de onda de la radiación dispersada.
- La relación entre variables y es más factible un tratamiento teórico, pero debido a su complejidad raras veces se aplica a problemas analíticos específicos.
El
procedimiento generalmente es empírico y sólo se consideran 3 factores:
- La
concentración: Mayor sea el número de partículas, mayor es la
dispersión.
- Tamaño
de la partícula: Factores como el pH, la velocidad y orden de la mezcla, concentración
de los reactivos, duración del estado de reposo y la fuerza iónica.
- Longitud
de onda: Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero si están
coloreadas, se debe escoger una porción del espectro electromagnético en
la que la absorción del medio se reduzca al mínimo.
NEFELOMETRO
Un
nefelómetro es un instrumento para medir partículas suspendidas en un
líquido. Esto lo hace empleando una fotocelda colocada
en un ángulo de 90° con respecto a una fuente luminosa. La densidad de partículas
es entonces una función de la luz reflejada por las partículas a la foto
celda. Cuanta más luz se refleje en una determinada densidad de partículas
depende delas propiedades de las partículas como su forma, color y
reflectividad. Estableciendo a una correlación de trabajo entre turbidez y
solidos suspendidos (que más útil, pero generalmente una más difícil de
cuantificación de partículas) debe ser establecido independientemente para cada
situación.
gracias por la informacion, me sirvio para mi investigacion
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